注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
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9-甲氧基喜樹堿Hpt/HP(haptoglobin)  結合珠蛋白/觸珠蛋白抗原Troponin T/c  心肌特異性肌鈣蛋白T抗體

鹽酸石蒜堿H-ras/Ras/Ras p21 peptide  原癌基因H-ras抗原Tropomyosin  原肌球蛋白1抗體

光甘草定HSTF2/HSF2 peptide  熱休克轉錄因子2抗原TROP2/TACD2  細胞表面糖蛋白Trop2抗體（胰腺癌標志物蛋白）

橙黃決明素BCRP/ABCG2(breast cancer resistance protein)  乳腺癌耐藥相關蛋白（抗原）Trop-2  原肌球蛋白抗體

荷葉堿Hrasls3/HREV107(HRAS like suppressor 3)  HRAS樣抑制因子3抗原Trk C  酪氨酸激酶C抗體(神經(jīng)生長因子受體的一種)

鷹嘴豆芽素AHSP47(Heat shock protein-47)  熱休克蛋白-47抗原Trk B/NTRK2  酪氨酸激酶B抗體

10-羥基喜樹堿HSP-90 Alpha(Heat Shock Protein 90 Alpha )  熱休克蛋白90α抗體Trk B/NTRK2  酪氨酸激酶B抗體

可可堿HSP-105 (heat sock protein-105)  熱休克蛋白HSP105抗原TrK A/NTRK1  酪氨酸激酶A抗體

D-松HtrA2/Omi peptide  絲氨酸蛋白酶/線粒體絲氨酸蛋白酶多肽抗原Trk A/B/C  酪氨酸激酶A/B/C抗體

常春藤皂苷元IAA/BSA  吲哚-3-乙酸偶聯(lián)牛血清白蛋白TRIP1/PSMC5  甲狀腺受體相互作用蛋白1抗體
差異支原體PCR檢測試劑盒價格人MAX二聚化蛋白1(mxd1)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

人Na+/H+交換體3(NHE3)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT5克

人D樣受體(NLR)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：5克

人GO-A抗體(go-AAb)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：10克

人N端前腦素(NT-proBNP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃1克

人N端外顯肽(Ext-N)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃250毫克

人N端中段骨鈣素(N-MID-OT)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃1毫克

人N鈣黏蛋白/神經(jīng)鈣黏蛋白(N-Cad)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：500毫克
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。