產(chǎn)品名稱：表達(dá)SV40T抗原胚腎上皮細(xì)胞；293FT
英文簡稱：293FT細(xì)胞

貨號：LZ-X968559
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁生長

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細(xì)菌或真菌污染，會嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時(shí)間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時(shí)，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細(xì)胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
3,5-二乙淡紫紫霉拉丁屬名: Lactobacillus  zeae

2-溴-5-乙玉米乳桿菌拉丁屬名: anatipestifer

2-溴-5-乙鴨疫里氏桿菌拉丁屬名: Flammulina velutipes

4-苯-1,2,4-三唑啉-3,5-二金針菇（毛柄金錢菌、冬菇）拉丁屬名: Auricularia delicata (Fr.) Henn.

全氟代丁烷皺木耳拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae

全氟代丁烷釀酒酵母拉丁屬名: Bacillus indicus

5-茚印度芽孢桿菌拉丁屬名: Millerozyma farinosa

5-茚粉狀米勒酵母拉丁屬名: Shewanella  sp.

1-溴十七氟辛烷希瓦氏菌拉丁屬名: choleraesuis

1-溴十七氟辛烷豬霍亂沙門氏菌拉丁屬名: Mucor petrinsularis

1-溴十七氟辛烷碎囊毛霉注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

3--6--2-吡啶美澳型核果褐腐病菌拉丁屬名: Enterobacter  sakazakii

3--6--2-吡啶阪崎腸桿菌拉丁屬名: Cunninghamella echinulata var. verticillata

葉酯孢小克銀漢霉輪生變種用途: 固氮。

葉酯固氮菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

5-羥-2-黃赭色鏈霉菌拉丁屬名: Agaricus bisporus
293FT細(xì)胞豚鼠乳脫氫酶C(LDHC)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  2-氨-4-并噻唑假芽胞桿菌屬拉丁屬名: Streptomyces hiroshimensis

豚鼠破骨相關(guān)受體(OSCAR)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2-氨-4-并噻唑廣島鏈霉菌拉丁屬名: Paenibacillus tianmuensis

豚鼠Bcl2同源拮抗劑1(BAK1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒吲哚-3-乙天目山類芽孢桿菌用途: 分類、研究，具有處理養(yǎng)殖廢水潛力。

豚鼠糖皮質(zhì)激素受體α(GRα)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 吲哚-3-乙邊緣假單胞菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

豚鼠補(bǔ)體因子1R(Clr)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒吲哚-2-羧聚生殼菌拉丁屬名: Debaryomyces hansenii

豚鼠質(zhì)裂解蛋白/質(zhì)溶素(MAT)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒吲哚-2-羧漢遜德巴利酵母 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

豚鼠蕈型乙酰膽受體(M-AChR)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 1,3-苯二粉紅單端孢霉拉丁屬名: Lactococcus  lactis

豚鼠絲裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒1,3-苯二乳乳球菌拉丁屬名: Arthrobacter protophormiae

豚鼠質(zhì)金屬蛋白酶-13(MMP-13)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒1,3-苯二原玻璃蠅節(jié)桿菌拉丁屬名: Arthrobacter  nicotinovorans

豚鼠F-框蛋白2(FBXO2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  Fmoc-O-磷-L-酪氨噬尼古丁節(jié)桿菌拉丁屬名: Streptococcus  thermophilus

豚鼠血管舒緩激肽(BK)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  2-氧-4-(2-氨乙)苯酚嗜熱鏈球菌拉丁屬名: Ramlibacter tataouinensis

豚鼠磷脂酶A2激活蛋白(PLAA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒DL-阿拉伯糖Ramlibacter tataouinensis 拉丁屬名: Pseudomonas azotoformans

豚鼠水通道蛋白2(AQP-2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 DL-阿拉伯糖產(chǎn)氮假單胞菌（可定）拉丁屬名: Bacillus mojavensis

豚鼠β甘露糖苷酶(β Manase)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 DL-阿拉伯糖莫哈韋芽孢桿菌拉丁屬名: Hypocrea  virens

豚鼠黑素瘤黏附分子(MCAM)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒N-Acetyl-Val-Ala-Asp-al變綠肉座菌拉丁屬名: Saccharomyces exiguus

豚鼠黑色素瘤標(biāo)記物(MART/Melan-A)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒4,4′-(六氟異亞)二酚少孢酵母注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用